猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)灭活疫苗不同佐剂对新生仔猪的免疫应答

题目：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)灭活疫苗不同佐剂对新生仔猪的免疫应答摘要：为新生仔猪接种疫苗可以预防猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，这是一种重要的猪病原体，在世界范围内对不同年龄的猪造成福利和健康问题。然而，新生仔猪的免疫力与成年猪有很大不同，因此可能需要不同的疫苗。我们研究了是否可以用含有水包油(O/W)乳剂的佐剂(含或不含Toll样受体(TLR)激动剂)以及改变肌肉注射(i.m)到皮肤注射的给药途径来改善新生仔猪PRRSV灭活疫苗的免疫原性和有效性。3日龄PRRSV阴性仔猪(n=54，分为6组)在4周后接种了启动免疫和加强免疫。疫苗配方包括不同的O/W乳剂(Montanide™ISA28RVG (ISA28))、用于肌肉注射(i.m)的角鲨烯水乳剂(SWE)或用于皮肤接种的角鲨烯稳定乳剂(SE)或TLR1/2、7/8和9激动剂(TLRa)与iPRRSV毒株07V063的混合物。这些疫苗分别采用肌肉注射(i.m)方式(ISA28、SWE、TLRa或SWE+TLRa)或采用溶解微针(DMN)贴剂注入皮肤(skiSE+TLRa)。所有猪只在加强免疫三周后接受同源PRRSV的攻毒。在接种疫苗和攻毒后的几个时间点测量特异性抗体、IFN-γ产生和病毒血症，同时在尸检时研究肺部病理。加强免疫后，只有ISA28诱导了特异性抗体反应，而SWE组产生了特异性T细胞IFN-γ反应，ISA28的反应较低，其他组不存在。这表明，新生仔猪初次接种疫苗在加强接种疫苗后诱导了特定的免疫反应，依赖于乳剂配方，但不依赖于TLRa或传递途径的存在。尽管测量出了免疫反应，但没有一种疫苗显示出任何功效。需要进一步研究引流淋巴结的早期免疫反应，以阐明TLR激动剂在新生仔猪疫苗中的潜力。    表1：实验设计：疫苗配方、给药途径和处理天数。    注释：Group：组别Vaccine formulation：疫苗配方Adjuvant：佐剂TLR agonist：Toll样受体激动剂O/W emulsion：油包水型乳状液Antigen[yes/no]：抗原(是/否)Delivery route/Dose (ml)：给药途径/剂量(ml)Prime/boost/challenge /necropsy[study day]：启动/增强/攻毒/尸检图1：新生仔猪TLR激动剂刺激后细胞因子的反应。用不同的Toll样受体激动剂(TLR1/2，TLR7/8或TLR9)和TLR激动剂的组合(TLR1/2+7/8+9和TLR1/2+9)刺激3日龄猪(n=4)的PBMCs。通过Luminex multiplex检测上清液中的(A)IFN-γ，(B)IL-12p40，(C)IFN-α，(D)IL-4，(E)IL-1β，(F)IL-6，(G)IL-10，(H)IL-8和(I)TNF。    图2：PRRSV特异性抗体增强免疫和攻毒后的反应动力学。采用ELISA法测定PRRSV抗体滴度。(A)使用不同佐剂(ISA29、SWE、TLRa、SWE +TLRa)和皮肤疫苗(skiSE+TLRa)，在未接种(NV)或iPRRSV疫苗的猪只中，加强疫苗接种(D28)后PRRSV特异性IgG滴度。（C）表示在D49处攻毒。(B)攻毒后产生特异性抗体的曲线下面积(AUC)。    图3：PRRSV特异性T细胞IFN-γ增强接种和攻毒后的反应(ELISpot)。(A)未接种(NV)或iPRRSV接种猪只使用不同佐剂(ISA29、SWE、TLRa和SWE+TLRa)和皮肤接种(skiSE+TLRa)时，PRRSV特异性IFN-γ分泌细胞(SC)的数量；(A)加强接种后2周(D42)和(B)攻毒后7天(D56)。图4：PRRSV特异性细胞内IFN-γ反应和淋巴细胞亚群(流式细胞术)。使用不同佐剂(ISA29、SWE、TLRa和SWE+TLRa)和皮肤疫苗(skiSE+TLRa)体外再刺激未接种疫苗(NV)或iPRRSV接种动物的PBMC后，PRRSV特异性IFN-γ反应。分析不同T细胞亚群(CD4+(Th),CD4+CD8+(Tm)CD4��CD8+(Tcyto))和NK细胞(CD3��CD8+)中IFN-γ阳性细胞的百分比(A)加强接种后2周(D42)和(B)攻毒后一周(D56)。(C)在攻毒后7天(D56)和13天(D62)测定活PBMC种群内B细胞(CD3��CD21+)、T细胞亚群和NK细胞的相对比例。    图5：攻毒后PRRSV在血清中的清除率。在攻毒后(dpi)不同时间点用病毒滴定法测定血清病毒滴度(log10 TCID50/mL)。(A)使用不同佐剂(ISA29、SWE和SWE+TLRa)和皮肤疫苗(skiSE+TLRa)接种未接种(NV)或iPRRSV疫苗的动物的血清病毒滴度。(B)曲线下面积(AUC)。