不同条件下ASFV核酸稳定性实验

018年8月非洲猪瘟进入中国以来，极大地促进了实验室猪病检测诊断的发展，非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸检测已经是生产上必不可少的环节，但是基于核酸片段扩增的qPCR方法不能够区分猪源样品和环境样品中ASFV的生活学活性（即是否具有感染性），像ELISA和IFA（间接免疫荧光）方法对于是否能够检测到活毒也不能够提供精准的结果，因为灭活的病毒/死毒也可能具有完整的病毒蛋白组分。传统的病毒分离实验工作量较大、耗时较长，不适用于临床。因此，开发一种快速检测ASF活毒的方法对于ASF的临床防控、洗消后的评估、药物研发等多个方面具有重要意义。许多科研单位对非洲猪瘟病毒活毒检测方法也进行了摸索与尝试（Frontiers in Microbiology | ASF活毒快速检测新方法？），但并未得到实质性的落地与应用，目前生产上仍然是以qPCR的检测方法为主，但我们必须明白，qPCR检测阳性并不代表病毒一定具有活性。

2023年11月，Veterinary World在线发表了五邑大学等题为 Stability of African swine fever virus genome under different environmental conditions的研究论文。该文对不同温度、酸碱度及消毒方式下非洲猪瘟病毒阳性核酸进行了qPCR检测，以期为非洲猪瘟的现场防控提供参考依据。1）不同温度处理下非洲猪瘟病毒核酸稳定性检测      在4℃、22℃、37℃、56℃及70℃温度条件下，分别作用1分钟、5分钟、30分钟、1小时、3小时、6小时、12小时、1天、3天、5天后进行非洲猪瘟病毒核酸qPCR检测，结果发现均可以检测到非洲猪瘟病毒核酸，无显著性差异，表明不同温度及不同温度下的处理时间对非洲猪瘟病毒核酸的稳定性影响很小，实验温度条件下无法降解非洲猪瘟病毒核酸。2）不同酸碱度下非洲猪瘟病毒核酸稳定性检测    将pH3-10的15微升溶液与50微升非洲猪瘟病毒阳性血清在26℃±1℃下混合作用1小时后进行非洲猪瘟病毒核酸qPCR检测，结果发现均可以检测到非洲猪瘟病毒核酸，基本无显著性差异，表明不同酸碱度对非洲猪瘟病毒核酸影响很小，实验酸碱度条件下无法降解非洲猪瘟病毒核酸。
3）不同消毒方式下非洲猪瘟病毒核酸稳定性检测     将15微升消毒剂（洗手液、RNA酶、过氧化氢、酒精、84）与50微升非洲猪瘟病毒阳性核酸在22℃混合作用5分钟、15分钟、30分钟后进行非洲猪瘟病毒核酸qPCR检测，结果发现作用5分钟后均可以检测到核酸，15分钟后洗手液、RNA酶处理下检测阴性，30分钟后检测均为阴性，提示我们：实验室条件下可用核酸去除液及时降解核酸，使用洗手液洗手效率较高，而用84、酒精、过氧化氢等需要充足的作用时间才能彻底降解核酸。