实验室污染的原因及解决办法

随着非洲猪瘟的爆发，越来越多的养殖户、屠宰场等都有了一个概念——PCR检测，不过正是由于灵敏度高，极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性，因此，了解核酸污染的原因和清除核酸污染是分子实验室的工作重点。

一、污染源来源

1、样本间污染

阳性样本外溢，例如纱布采集环境样本密封不严，导致实验室移液器、离心机、耗材等形成交叉污染，特别是只有一个离心机的情况下，进行各种试剂组分、不同盲样的离心，如果离心管外部沾染病毒、阳性核酸或阳性质粒，就容易造成污染。

2、阳性对照污染

主要为阳性对照使用前未离心，开盖过程中导致泄露沾染到手套或移液器上，时间久后导致环境污染；其次是在加样过程中，回枪过快导致阳性对照进入移液器内部污染。

3、扩增产物污染

扩增结束后立马打开PCR仪盖，导致反应盖弹开，运行结束后尽量使仪器冷却10分钟左右；耗材质量不好，密封不严实导致；这是因为PCR扩增是以2ⁿ进行拷贝，极微量的模板就能导致大量的扩增产物污染，形成假阳性。

二、实验室污染的处理办法

1、暂停所有实验操作，加大实验室的通风。

2、清理实验室内所有物品，寻找污染来源。

3、对实验室内所有表面（台面、地面及墙面） 进行消毒；对移液器内外表面、核酸提取仪内部先用75%酒精擦拭后，再用核酸去除剂（清水也可，稍微湿润，避免水渍进入仪器内部）擦拭，同时启用备用的移液器；离心管架、反应管架、枪头盒等可重复使用的物品浸泡到2%的84消毒液中过夜，第二天用清水清洗后晾干使用。

4、75%酒精或2%的84消毒液空中喷雾（注意：2%的84消毒液不要喷洒到仪器或铁的桌子等，避免腐蚀；也可使用其他消毒剂，如次氯酸，新洁尔灭等）。

5、开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间（开一整晚）。

6、将移液器表面用75%酒精擦拭，放在室外通风处晾干，反复操作（放在室外环境中不要拿到屋内，一周左右）。

7、以上措施每日进行，直至污染消除。

8、用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测（用棉签蘸取生理盐水），连续3次均阴性后方可进行常规检测。

实验室一旦发生污染，第一时间不是纠结于到底哪里污染了，到底谁的责任导致的污染。绝大多数时间我们无法确定污染源，更不能轻易排除一项污染源，而是第一时间果断采取清除污染的措施。这些措施是否有效还需要后续验证。下图附上实验室污染源查找的方法。

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