3 日常监测参照《猪场疾病防控监测及病料采样检测计划》进行。
猪场疾病防控监测及病料采样检测计划
合理的病料采集在实验室检测中是非常重要的,现对猪场常见病料的采集和保存作如下规定。
一、常见病料的采集
1、常见病料的采集和保存注意事项
1.1采集病料要保证及时新鲜,选择临床症状典型的发病猪只,死前采用前腔静脉放血采样,如果是病死后猪只解剖采样最好死亡时间不超过6小时,夏天不超过3小时。
1.2组织的选取:采集病变组织,每份组织单独用自封袋装,现场一般采集心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等,活体剖检。注意:操作人戴好一次性PE手套(保护自己,避免污染样品),佩戴口罩。组织采样尽量无菌操作(烧烙)。
1.3肠道内容物的采集,肠道选择特征明显的部分,将带有内容物的肠管两端用棉线结扎,从两端剪断;或用棉拭子插到直肠粘膜表面采集粪便;注意不要采抗生素治疗过的病猪。
1.4全血:凝固样品3-5毫升,不能冷冻保存,应该在2-8℃冷藏,冰箱保存时间以不超过3天为宜。全血样品时间过长,将会引起红细胞破裂,影响血清的提取,影响抗体效价。所以采集的病料应加足够的冰块放入保温箱中尽快安排送检。
1.5 血清:血清体积应大于1毫升,无严重溶血,澄明透亮,无胶冻样物质(限位栏饲喂的猪只,最好是空腹采血),采血后轻拿轻放,就地放置,待血液凝固方可移动。注意血清样品不合格,可能导致检测结果出现假阳性或者假阴性,使用1.5ml或者2ml的离心管装血清;分离好的血清使用油性记号笔标记样品编号,样品采集后应及时送检,血清样品在2~8℃保存不可超过2天,或在-20℃保存不超过30天,避免反复冻融。
1.6 粪便:需采集刚排出的新鲜粪便,样品用5 ml或10 ml离心管或干净的自封袋装,体积应大于3 ml,粪便不能装得过满。
1.7环境拭子的采集:
人员:用蘸有生理盐水的长棉签对人员及携带物品进行多点重复采样,包括头皮、指甲缝、鼻孔、鞋底、手机及物品外包装等。
车辆:用蘸有生理盐水的棉签对车体进行多点采样,包括驾驶室(地垫、方向盘)、车辆栏杆、轮胎、车厢,每个点采样面积应不低于50cm2
2、各种脏器采集应遵循采集脏器含毒量高的原则。
2.1疑似猪瘟(HC):主要采集扁桃体、肺门淋巴结、脾脏、肾脏和全血。
2.2疑似猪繁殖与呼吸障碍综合症(PRRS):主要采集肺组织、血清、扁桃体、脾淋巴结、粪便,流产胎儿的脾肺,血清和胸水也是适宜的检验材料。
2.3疑似猪伪狂犬病(PRV):主要采集病猪脑组织和扁桃体;另外,鼻咽分泌物也可用于病毒分离。
2.4疑似猪口蹄疫(FMD):采集未破裂或刚破裂的水疱皮(液),对新发病死亡的动物可采取扁桃体、淋巴结组织等。
2.5疑似猪传染性胃肠炎(TGE):主要采集十二指肠、空肠及回肠的黏膜,在鼻腔、气管、肺的黏膜及扁桃体、粪便中也可分离到病毒。
2.6疑似猪流行性腹泻(PED):主要采集临床上发病12h没有治疗过的仔猪空肠及回肠段,至少采5头。两端以无菌棉线结扎后放到冰箱速冻24小时,然后以泡沫箱加冰块送实验室检查。每窝拉稀仔猪,用一根直肠棉拭子采3头即可。每个棉拭子独立包装,要求一窝一个包装。
二、检测和监测申请程序
实验室主要开展抗原检测(PED病原、蓝耳病原、非洲猪瘟病原)、抗体监测(猪瘟、蓝耳、伪狂gE、伪狂gB、口蹄疫O型等抗体)。
1、为方便实验室人员及时掌握检测需求、提升检测效率并及时反馈检测结果,各养殖场送检病料及血清前需及时在OA上提交申请报告,化验室见审批报告安排试验。送检前请如实填写实验室送检申请表。
2、检测注意事项
2.1实验室送检申请表需认真填写,公司每个猪场,编号从公司名简称+2023-01开始,不得重复编号,便于实验室核对样品和及时进行检测。
2.2样品需添加适当数量的冰袋,用泡沫箱装,保证运送途中到达实验室前冰袋没有完全融化;
2.3送检样品不合格,血清样品编号不清,不予检测。
2.4为便于实验室集中检测,各检测单位送样尽量安排在周一至周五工作日时间。
2.5特殊情况下,紧急样品,当天收货,当天安排检测。请电话提前沟通。
4 蓝耳病稳定场管理措施
4.1 后备猪根据《免疫程序》进行蓝耳弱毒活疫苗免疫,检测合格后转入母猪场;
4.2 繁殖母猪群体需要根据《免疫程序》使用蓝耳弱毒活疫苗来进行常规免疫;
5 蓝耳不稳定场的管理措施
5.1 哺乳期遵循麦克雷贝尔( McRebel) 原则;
5.2 任何需要引进后备猪的繁殖群一次性引种后封群 6 个月。
6 蓝耳病急性爆发时的管理措施
6.1 蓝耳病爆发的诊断及检测确诊:
1) 当猪场出现流产的比例超过正常值的25%时,需要采集流产 2 周以内的母猪血样(如果流产母猪数不足,可以采集流产母猪两侧的母猪),或是流产胎儿、胎衣、死胎,样品 10-15 份;
2) 保育或育肥阶段发病,则采集 30 份感染初期症状的猪只血样或组织(肺、肺门淋巴结、扁桃体、脾),送到实验室进行 RT-PCR 检测蓝耳病原,如果 RT-PCR 检测结果为阳性,需要对CT值<30样品送检测序,鉴别PRRS病毒是一种新型毒株或者是农场中已经存在的毒株或是疫苗毒株。
6.2 措施:
1) 母猪场:a.诊断确认当天对所有成年猪(后备猪,母猪,诱情公猪)进行蓝耳疫苗常规剂量免疫,30天后再加强免疫一次;b.哺乳期遵循 McRebel 原则;c. 对所有新引进繁殖群体的后备猪进行 3-6 个月的封群处理。
2) 公猪站:a.只要疑似蓝耳病疫情发生或公猪发热并厌食,该公猪精液就不能再供精,必须启用另外一个公猪站提供精液或者使用深部输精;b.公猪站应尽可能完全清空并从阴性猪场引种;c.若没有新的种源,所有公猪要在 PRRS 爆发时及爆发后 30 天内进行两次紧急免疫;d.不再引种,进行封群处理 3-6 个月;e. PRRS 爆发后第 40 天开始,每周随机采集 30 份血清进行荧光定量 PCR 检测 PRRSv,连续进行 3 周,若连续 3 次检测结果皆为阴性,开始使用本公猪站精液;若有阳性,则继续监测,直至阴性为止。
3) 如果场内存在保育舍,PRRS病毒在保育阶段循环,应考虑保育段在免疫活苗后一个月实施部分清群,阶段性清空保育舍,加强洗消来缓解。
6.3 免疫程序:全场执行统一发布的免疫程序,种猪一年三次普免。
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