如何利用口腔液样本对猪场病毒性疾病进行监测？

现在，越来越多的猪场开始使用口腔液样本对猪群疾病进行监测。那么，哪些疾病更适合用口腔液进行监测呢？如何收集口腔液？口腔液的检测如何进行？这些问题可能都是兽医从业者的困惑。

本文总结了在养猪生产中，口腔液样本的收集方法、检测和监测方案。旨在为广大养猪生产从业者提供帮助。

01、口腔液是什么？

口腔液是一种动态的复杂基质，由水、激素、代谢物、电解质、酶、抗体、粘蛋白和各种其他蛋白质组成。口腔液由口腔相关组织产生，例如唾液，唾液腺和扁桃体。

除了生理成分外，口腔液还含有微生物、饲料成分、药物化合物和猪从环境中获得的代谢物。口腔液采样可以将这些信息采集到样品中。

口腔液在猪场中的应用一般是将一段棉绳悬挂在猪圈中，然后通过压缩绳子来回收液体，可以从一头或一群猪身上收集口腔液。

02、口腔液的诊断能力

口腔液用于抗体监测

免疫球蛋白IgM、IgG和IgA可通过被动扩散或通过受体介导传递到口腔中，包括分泌型IgA，可以通过口腔相关组织中的浆细胞产生。

口腔液抗体和血清抗体同型动力学相似，口腔液抗体可用于非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、甲型流感病毒、猪圆环病毒2型和猪蓝耳病病毒的抗体监测。这些病毒的口腔液抗体已被相关研究证实。

通常IgG是口腔液酶联免疫吸附试验(ELISA)的首选靶标，因为其在检测中更稳定，并且能够获得更敏感的诊断和特异性分析（图1）。但是也有例外，在监测猪流行性腹泻病毒时，IgA具有最佳诊断效果。

口腔液用于核酸监测

口腔液可对多种病毒核酸进行检测，包括非洲猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒二型、猪圆环病毒三型、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻、伪狂犬病毒等猪相关病毒（表1）。同时环境中的病毒也会被口腔液样品检测到。

相比与血清和血拭子，口腔液在一些病毒中可以更快被检测到。例如口蹄疫病毒在感染1天后可在口腔液中检测到；伪狂犬病毒首先在呼吸道上皮细胞中复制，在病毒感染的第3天可在口腔液中检测到。猪瘟病毒在感染5天后可在口腔液中检测到。

同样在非洲猪瘟病毒监测中，口腔液检测比血液检测要早1-3天。在接种PRRSV后不同类型样品的PCR检出时间和检出稳定性存在差异，血清和血拭子在第1-3的检出率要比口腔液的检出率高，但在病毒感染的第5天，口腔液会更稳定的检出PRRSV（表2）。

03、口腔液比口鼻拭子的检出率更高

不同的口腔采样方式在检测结果中可能出现很大的差异。15头公猪在注射活病毒PRRSV疫苗后，14天内的口腔液体和“泡沫唾液”(即口腔泡沫产生的成熟公猪)的测试结果。

在疫苗接种后1-14天，71%(50/70)的口腔液和19%(13/70)的泡沫唾液样本PRRSV RNA阳性。在接种8-14天后，口腔液PRRSV ELISA抗体阳性率为69%(24/35)，泡沫唾液阳性率为0%(0/35)。

接种了FMDV、IAV、塞内卡病毒A(SVA)和猪膀胱囊病病毒(SVDV)的动物的猪口腔或鼻拭子与口腔液的检出率存在差异。

在每项研究中，口腔液比拭子提供了更高的RNA检出率(表3)。这些结果可能是由于拭子本身收集的靶标量较少，而在收集过程中又进一步稀释了样品。

特别是，将拭子置于1-2 ml的液体中运送到实验室会降低样品中靶标的浓度，从而降低检测的概率。同时采集口腔拭子的过程会引起应激反应，包括供应口腔黏膜、唾液腺和唾液管的血管收缩。这种反应减少了液体流向口腔(“口干”)并改变了口腔液体成分。

04、如何收集口腔液？

口腔液体取样从≥21日龄的猪群中收集很容易，方法是让棉绳悬吊30分钟供猪群咬绳。大多数口腔液研究都是在25头猪的猪圈中进行的，在这种情况下，一根绳子将在30分钟的采样中提供约80%的动物口腔液样本。如果按照喂养计划，在猪刚醒来的早晨和喂食前最容易收集样品。

具体操作请参考曲博士公众号文章《非瘟精准剔除唾液棉绳采样安全操作实践》

05、如何保存口腔液？

猪口腔液中抗体的稳定性描述不佳，现有数据仅限于PRRSV。口腔液中的抗体降解是温度依赖性的，例如，在4℃保存的样品中，PRRSV ELISA S/P值在12-14天内保持稳定，随着温度的升高，降解速度也随之加快。在30°C下保存72 h后，口服液中未检测到抗体。冷冻口腔样本用于后续的PRRSV抗体检测是一种安全的选择，抗体口腔液对“冻融”降解具有高度的抵抗力，反复“冻融”的样品中PRRSV ELISA S/P值一致。

根据已发表的数据估算，RT-PCR检测到的PRRSV RNA在口腔液中的半衰期约为13小时(30°C)、42小时(20°C)和14天以上(小于10°C)。与抗体不同，核酸容易受到冻融降解的影响。这种效应在病毒之间是不一致的，冷冻口腔液在4°C下解冻过夜比在22°C下解冻产生更高的PRRSV RT-PCR阳性结果(分别为94%和80%)。

因此，为了在现场采集口服液时保证检测结果，采集后应尽快冷藏(4℃)或将样品放入含有碎冰或冰袋中保存。

06、总结

口腔液是通过猪咬棉绳收集到的液体不同于口鼻拭子，目前口腔液已在多种病毒的抗原检测中被应用，例如非洲猪瘟病毒、猪蓝耳病毒等。

在临床的实践操作中，口腔液作为主要保育育肥猪采样方式，为非洲猪瘟病毒对保育育肥猪的早期诊断提供了有效可行的诊断方式。同时口腔液可作为抗体监测的一种方式，目前猪相关的主要病毒性疾病都可进行抗体检测。

但要注意的是口腔液的保存受温度的影响较大，建议在现场采样时应尽快冷藏或将样品放入冰袋中保存，以确保检测的有效性。

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