猪血样采集原理与采集方法讲解

猪流行性腹泻（PED），是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种高度传染性疫病，临床症状主要表现为呕吐、水样腹泻、脱水，哺乳仔猪感染发病率和死亡率可高达100%。今天详细介绍一下猪流行性腹泻（PED）方面的新知识。

1病原学

PEDV属α冠状病毒，只有一种血清型。病毒颗粒有囊膜包裹，病毒表面布满刺突蛋白（S蛋白）呈典型“皇冠样”结构，病毒基因组为长度28kb的正链RNA，编码S（Spike）、M（Membrane）、E（Envelope）、N（Nucleocapsid）四种结构蛋白。基于全基因组的系统发育分析，全球PEDV毒株分为两个大群，分别是上世纪70年代在欧洲首次出现的经典毒株和2010年后出现的变异毒株，2010年后出现的毒株又分为非S INDEL毒株和S INDEL毒株。

图1.基于全基因PEDV毒株分群(Lin, et al. 2016)2 流行病学

PED最早于1971年在英国报道，随后传至欧洲其他国家，1978年在比利时首次分离到病毒（CV777株）并命名。2010年高毒力PED在我国暴发，仅1-2年时间造成1000万头以上的仔猪损失。2013年，美国发生了PED疫情，损失也超过800万头仔猪。直到2016年，包括非S INDEL和S INDEL在内的变异毒株已经在北美洲、南美洲、亚洲和欧洲广泛传播。

直接或间接粪口传播是PEDV主要的传播途径。被污染的设备、饲料、车辆或人员都可能成为PEDV的传播媒介。感染试验评估发现，传染性排毒可以持续到感染后14-16天，在感染后42天，一些猪只粪便中仍可检测到PEDV核酸，表明粪便中PEDV核酸存在时间比传染性排毒持续时间更长。

仔猪在断奶时由于失去乳源免疫可再次感染PEDV，导致PEDV在猪群中持续存在。所以养殖场一旦暴发PED后，往往会变成地方性流行病。

3致病机理

PEDV感染导致肠道上皮细胞大量消失或肠道细胞功能障碍，最终导致消化、吸收不良性腹泻。PEDV急性感染破坏肠道完整性，导致肠道内水分丢失，渗透压升高。2-3日龄仔猪与3周龄仔猪相比：肠道绒毛细胞更新速度缓慢；肠道干细胞、隐窝细胞增殖更晚；先天免疫功能尚不健全，这可能是PEDV感染一周龄以内仔猪死亡率高的原因。

4临床症状

PED典型症状包括水样腹泻、呕吐、食欲减退和精神沉郁等。所有阶段的猪只均易感，但仔猪感染发病率接近100%，一周龄以内仔猪感染可能死于脱水，死亡率从50%-100%不等，母猪和育肥猪感染主要表现为沉郁和厌食，也有可能出现腹泻，但1周内可恢复。

图2.PED变异毒株发病症状及病理变化

5预防与控制

PEDV具有高度传染性，猪场需采取严格的消毒和生物安全措施来防止病毒传入，如避免不同来源后备猪只混群；确保猪场设施和运输车辆严格清洗、消毒和干燥；避免不同栏舍之间物品、人员交叉等，需保证产房温度，尤其是小环境温度在合理范围。

PEDV作为RNA病毒，具有高度的变异性，当前我国PEDV流行毒株也已经发生变化，为防止新的变异毒株出现，在PED防控过程中应该注意：监测场内腹泻病原的感染情况，及时通过基因测序掌握PEDV基因型的变化，选择与流行毒株同源性匹配的疫苗，合理制定免疫程序，对后备猪进行隔离驯化，诱导母猪产生高水平的乳源免疫，提升群体免疫。

加强产床、粪池、通风口消毒，避免人员物品的交叉，切断病毒在场内的循环；做好新生仔猪保温，确保仔猪吃足初乳，提高仔猪对PEDV的抵抗力。

6诊断

PED诊断主要基于临床症状和病原检测，由于猪肠道冠状病毒感染临床症状十分相似，通常需要通过实验室检测进行鉴别。对于病毒RNA的检测，RT-PCR和荧光定量RT-PCR应用最为广泛。一些新技术如二代测序（NGS）可用于临床样品中完整病毒基因组的测序。

图3.PEDV病变及电镜下形态(Oka, et al. 2014)

PEDV初次感染/免疫后第7天，血清N蛋白IgM水平达到峰值，第14天S蛋白IgG和sIgA水平到达峰值；中和抗体最早在第7-14天出现，在第21天达到峰值。

最新的研究显示，猪口腔液中也可以检测到IgG和IgA抗体，适用于猪群早期感染监测。母猪肠道感染PEDV后可诱导黏膜免疫，在乳汁中产生高水平中和抗体和sIgA抗体来保护新生仔猪，乳汁样品抗体检测常用于评价疫苗的免疫效果。目前已有多种ELISA试剂盒，可以实现不同样品中PEDV抗体的检测。在Vero细胞上进行的病毒中和试验（VN），用于评价PEDV中和抗体具有重要的临床意义。

图4.PEDV感染后抗体消长规律

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