来源:牛伟杰
非洲猪瘟病毒已成为兽医检测实验室最重要的病原检测项目之一。许多实验员在检测操作中已具备相当丰富的经验,包括核酸提取、qPCR扩增等。但部分猪场实验室仍存在检测结果“不准确”、“不敏感”的问题,其中采样有效性低是罪魁祸首之一。
当有病毒存在猪体内或环境(例如运猪车、门把手等)中时,空间分布或时间分布并不是均匀的,此时如同食客在餐厅食用一道撒盐不均匀的菜品,随机吃一口未必能尝到盐味,亦或如赏月时需要时间合适。本文就高效采样操作展开讨论。
1.猪只日常监测
1.1
大栏
建议采用口腔液+尾跟血。可采集到的病毒感染的更长时间分布。
血液:尾根静脉采血:将猪站立式保定,将猪尾抬起与背中线平齐, 在近尾根与肛门间3~5cm处进针;出轻扎血后立即用灭菌的棉签按压出血点30秒以上。
血液
口腔液:棉签深入鼻腔或口腔至少8cm以上,搅动三圈,当棉签完全润湿后取出。
口腔液
耗材:灭菌2mL EP管、自封袋、记号笔、长棉签(15cm/小头)乳胶手套、一次性PE手套
分别使用两根棉签采集口腔液和血液后,放入同一EP管中(折入棉签头),记录该猪编号。
1.2
大栏
口腔液可采用棉绳,疑似发病猪只个体采集口腔液+血拭子(参照1.1)。
①固定取样绳:在栏舍内悬着一个位置固定取样绳,要保证栏内所有猪均可接触到取样绳。固定位置应该干净,远离饮水和进食区。取样绳低端应与猪站立时嘴的高度相平。
如果同栏内分配多个取样绳,它们的位置尽可能的分开。
宜在进食前两小时或进食后两个小时后进行采样
②取样绳放置时间为30分钟。如果发现采样对象对取样绳不够活跃,可延长至1小时或少量涂抹香料。
③小心取下取样绳,注意不要接触到地面。将取样绳内的唾液挤至无菌自封袋内。
④将上述自封袋剪开一个小口,将里面的唾液挤出至准备好的无菌试管内。每个样品至少需要2ml。
⑤收集后,如果发现试管内有明显杂质,如饲料等,则需用离心机对样品进行处理。离心机2000转离心1分钟。
⑥采集工具
棉绳选择原色,直径断奶仔猪为1厘米,育肥猪2厘米,禁止使用合成纤维绳,不吸水。一次性乳胶手套、一次性PE手套、5-12毫升的灭菌试管、无菌的自封袋、冰盒(带冰袋)。
1.3
环境样等拭子
1.3环境样等拭子
屋舍:采样区域包含但不限于隔离点、生活区、办公区、生产区、出猪台、场内车辆、无害化池井、干道、水源等。门把手是重点。在地面上可采用五点采样法,正方形四个点+中间,或用滚轮、拖布等工具固定纱布采集地面。
车辆:重点是运输栏的地面要采集到猪的排泄物等,司机室的门把手、脚踩的地方也需要采集到。
人员:使用纱布对暴露在外面的所有部分擦拭包括头发、脖子、衣服裤子和鞋面鞋底,双手采集是重点,包括指甲缝。
物资:所有进场物资,采样区域包含但不限于:物资最表面、底面等(小件物资尽量全覆盖采样)。
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